primer5.0设计引物-如何用PRIMER5.0设计引物

点文件,选新建DNA序列(File――New――DNA Seqence)然后把要设计引物的序列复制进去就行了(如果你要是愿意也可以一个一个碱基的打进去),然后点Primer进入到引物设计界面,进去后选点 Search 设置相应相应的条件,如:你要设计PCR扩增还是测序引物,是正向、反向还是双向,在片段中的那个位置设计及引物的长度等等,设置好后一路OK点下去就行了,然后就会有引物出来供你选择了。

哈哈不过具体的步骤1L那个网址好像已经给出了,不过在设计引物时LZ还要注意些条件,如TM值和GC一类的,还有引物长度等等^_^

反正我一般设计引物的时候TM和GC都控制在50-60之间,长度一般18或19个碱基(555合成的时候按碱基收费呀555),错配和发卡都没有,不过引物二聚体有的话问题倒是不大(反正我设计出来有二聚体的引物基本都OK)然后就是最好不要有4个或以上连续的碱基,再有就是不要在重复序列里设计引物。

只要注意以上这些的话设计出的引物那里测序或扩增都OK

呵呵希望对LZ有所帮助

进入软件,genetank窗口file---new----DNA sequence进入序列输入版块。然后control+v输入序列,如不改变序列,选择AS菜单。

然后进入primer引物设计。进入search,点OK。系统自动生成引物。

选你需要的就可以了。(有评分)。如要克隆基因,则在primer菜单下手动设计。

一、PCR引物设计原则

二、Primer Premier 5.0软件设计引物

三、引物设计步骤

①输入序列:安装好软件后,首先打开软件,左上角来操作,file-new-dna sequence,这一项可以把复制的序列粘贴进去,也可以选择另一个file-open-dna sequence去open一个新的文件。②点击Primer进入引物设计界面。③点击引物设计界面上的search按钮进行搜索选项设定。④点击搜索选项界面上的OK按钮可得到引物设计结果。⑤选择分值高的引物对作为实验合成引物选项。⑥根据需要对引物进行编辑。