引物设计网站-基因克隆中有关点突变引物设计问题

第一次见于 Up主:无Ct和没条带的视频 #qPCR系列#傻瓜式设计定量引物+引物特异性查看

可以根据以下步骤操作:

1、NCBI搜索该植物的你想要扩增的基因,下载gene序列。

2、通过在线软件设计引物,其中需要注意的参数如下:

扩增产物长度300-500bp为宜

GC含量40%-60%

引物长度在18-27bp

引物与引物,引物与自身之间不要超过4个碱基互补的现象

引物之间不能出现发夹结构

引物设计的网站有:

NCBI

primer3 plus

primer 5

oligo7等等

3、针对植物的DNA抽提试剂盒抽取样本DNA,稀释到合适的浓度备用

4、扩增试剂盒对特定基因进行扩增

可以直接送PCR产物送sanger测序或者如下操作

5、琼脂糖凝胶跑胶,根据自己引物的大小判断产物是否为自己设计的引物所能扩增的大小。

6、胶回收并将产物送sanger测序,或者是取扩增体系的一小部分进行凝胶电泳,确认条带大小无误后,剩余扩增产物送sanger测序也可以,一般测序公司会进行切胶的。

7、测序公司返回的数据可以和引物设计时的扩增产物进行对比研究,就可以知道是否为该基因了。

楼上说的不错。告诉你一个网站,

,在线设计引物,网站里面提到的变量就是你要注意的地方。你把模板序列,要求的碱基长度(一般16-20),退火温度,等信息都输进去,就会计算出最合适的引物,还有几对给你候选。我们实验室每年2-3篇Nature,Science,也是用这个来设计引物的,呵呵